Rêbazên Molecular lêkolînên biyolojîk û bikaranîna wan

biyolojîk Molecular metodên lêkolînan ku roleke giring di derman modern, zanist, saziya tipa edlî, û biyolojiyê de bilîze. Sipas ji bo pêşketina di xebatê de ji DNA û RNA de, kesê karibe bi ilham genên ji organism biryarê li agent înfeksiyon, ji bo naskirina acid nucleic xwestin li Tevliheviyeke ji asîdên, hwd e

rêbazên Molecular-biyolojîk. Çi ye?

Back di 70-80s ji zanyarên pêşî ji deşîfre bû genên mirovan. Ev bûyera qebûlbar ji bo pêşketina endazyariya genetîk û biology gerdî da. Study of milkên ya DNA û RNA de hatiye wê wateyê ku ew Niho mimkin e mirov ji bo bikaranîna van asîdên nucleic ji bo armanca nasîna nexweşiyê, gene xebatê de.

* Amadekirinê ya DNA û RNA

biyolojîk Molecular rêbazên pişkinînan lazim Guherandinên maddî: gelek caran ev acid nucleic. ne bi awayên cuda hilbijêre van madeyên ku di hucreyan de ji organîzmayên zindî heye. Her welat xwediyê awantaj û dezawantajên xwe, û divê ev yek di dema hilbijartina rêbaza biçûkxistin, asîdên nucleic di forma pak lê bê nêrîn.

1. Amadekirinê ya DNA destê Marmur. Metoda ji wana bi Bêna madeyên bi alkol, precipitates di encama DNA safî. The downside vê rêbazê ji ber bikaranîna madeyên rizîna, phenol û chloroform e.

2. tecrîda li ser DNA li ser keve. Cewhera serekî ya ku li vir tê bikaranîn - thiocyanate guanidine (GuSCN) e. Ev piştgêriya ji deposition ji acid deoxyribonucleic li substrates bi taybetî, ji ya ku ew dikare di pey re bi rîya tampon taybet komkirin. Lê GuSCN - an inhibitor yên TCP e, û heta beşekî biçûk yên ku dikujî di DNA tê razandin dikarin di kursa nerazîbûnên zincîra polymerase, ku girîng e, dema kar bi asîdên nucleic bandorê.

3. barînê ji ÿgir. Metoda ji yên berê li ku molekulên xwe bi acid dehoksiribonukleinovoy û ÿgir danenîye jî cihê ye. Ji bo vê jî, bi kar tînin exchangers ion de. Nebaşiya vê ev e ku ne hemû maddeyên dikarin bi cihbûna.

4. fîlmkişandina Mass. Ev rêbaza ku di bûyeran de tê bikaranîn dema ku tu ne hewce ye ku tu agahî di derbarê avabûna molekulek DNA'yê, û pêwîstî bi hin îstatîkan. Sedem ew e ku, strûktûra acid nucleic dikare Gava hûn paqijîyê, bi taybetî alkalies xwariye.

Dabeşandina ji metodên lêkolînan

Hemû rêbazên gerdî-biyolojîk yên lêkolînan bi nav sê komên sereke dabeş:

1. hêzbûna (bikaranîna pirejimarî ji enzîma). Ev de enzîm - berteka zincîra polymerase, ku roleke girîng di gelek rêbazên pişkinînan dilîze.

2. Neamplifikatsionnye. Ev kom ji rêbazên rasterast bi karê mixtures acid nucleic têkildarkirin. Nimûne 3 cureyên dixwin in, li durehîkirî birapêflbirin, û hwd.

3. Rêbaz a li ser bingeha qebûlkirina yên sînyal ji molekulek operasiyonekê de, ku reseptorên a DNA an RNA operasiyonekê taybet. Mînak - sîstema durehîkirî Hybride çareseriya System Capture (HC2).

Enzîma ku dikare di metodên lêkolînan biyolojîk gerdî bikaranîn

Gelek teknîkên teşxîsa gerdî karanîna yên berfireh ya enzîma. Li jêr tên bikaranîn gelek caran:

1. enzîman sinorkirina - "birrîn" li molekulek DNA ji bo parçeyên pêwîst.

2. polymerase DNA - synthesizes molekulek acid deoxyribonucleic cot-bilivin.

3. transcriptase Reverse (transcriptase berepaş) - ji bo sentez bike DNA ji template RNA.

4. ligase DNA - berpirs ji bo damezirandina zincîr phosphodiester di navbera nucleotides e.

5. exonuclease - jê re nucleotides ji beşên dawiya molekulek acid deoxyribonucleic.

Enzîm - rêbaza bingehîn yên amplification DNA

berteka zincîra Polymerase (enzîm) edî di biyolojiyê gerdî modern de tê bikaranîn. Ev rêbaza, li ku molekulek DNA yek dikare bê bidestxistin re hejmareke mezin ji kopiyên (molecule amplifying).

Erkên sereke yên enzîm:

- teşhîsa nexweşiyên;

- klonkirina beşên DNA, Gene.

Avabûye ji bo berteka zincîra polymerase pêwîstî bi hêmanên jêr e: molekulek DNA destpêkê, a polymerase DNA thermostable (Taq an Pfu), fosfat deoxyribonucleotide (çavkaniyan ji bingehên nîtrojen) de, astaran (2 Romayiyan 1 molekulek DNA) û bi xwe sîstema tampon ku dikare bimeşînin hemû bertekên.

Enzîm ji sê gavan pêk: denaturation, annealing Romayiyan û elongation.

1. denaturation. Germahîya ji 94-95 derece proshodit Celsius şikandina zincîr hydrogen di navbera du zincîran yên DNA, û wek encama em du gerdên single-bilivin.

2. astaran Galvanized. Germahîya ji 50-60 derecê pêşwîste astaran ewropiyan li çaraliyên gerdên acid nucleic single-yakî li gor type of Têkiliya.

3. Elongation. At agirê 72 derece ye, keça synthesized cot gerdên acid deoxyribonucleic bilivin.

sequencing DNA

metodên lêkolînan biyolojîk Molecular caran pêwîstî bi zanîna cihekê nucleotides li molekulek ji acid deoxyribonucleic. Ji bo destnîşankirina koda genetîk a sequenced. Sedema Molecular ya paşerojê dê li ser zanînan qazanckirî di diyarkirina cihekê mirovan dispêre.

Cûreyên jêr yên sequencing:

• sequencing ji aliyê Maxam-Gilbert;
• sequencing Sanger;
• pyrosequencing;
• sequencing nanoporovoe.